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 逆转录病毒包装

    逆转录病毒(Retrovirus)是一类已知的RNA病毒。需在逆转录酶的作用下首先将RNA转变为cDNA,再在DNA复制、转录、翻译等蛋白酶作用下扩增的一类病毒。该载体系统有两部分组成,一是带有外源基因的重组反转录病毒载体分子,二是能以反式提供病毒结构蛋白的包装细胞,其要求是能高效产生感染靶细胞的重组病毒颗粒,且无野生型的反转录病毒存在,后者是基因治疗安全性的关键问题。
 
1 逆转录病毒载体最大优点是:
1.1 转染范围广,可以感染各种细胞类型,如淋巴细胞或肝细胞、肌细胞等。
1.2 转入的外源基因可完全整合。
1.3 对细胞感染率高。
1.4 感染细胞不产生病变,可建立细胞系长期持续表达外源基因。
 
2 逆转录病毒载体的不足之处,如:
2.1 只能整合至分裂期细胞。
2.2 可插入外源基因片断小(<10kb),难以满足较大基因的插入。
2.3 病毒滴度是限制临床应用的主要方面。
2.4 有产生野生型病毒或辅助型病毒的可能,随机整合可能产生不良作用。
 
3 逆转录病毒包装简要流程
3.1 含有目的基因的逆转录病毒表达载体的构建和质粒纯化提取。
    注:客户也可以提供构建好的逆转录病毒表达载体。
3.2 逆转录病毒表达载体转染病毒包装细胞。
3.3 收集病毒液。
3.4 纯化和浓缩病毒。
3.5 分装、- 80 oC保存。
3.6 滴度测定及无菌检测。
 
4 本公司提供的最终产品包括:
4.1 重组后的逆转录病毒载体质粒以及测序图谱(客户提供质粒的除外)。
4.2 病毒无菌检测结果。
4.3 逆转录病毒储液及相应的病毒滴度。
 
5 我们保证:
5.1 制备的病毒颗粒携带片段的正确性(客户提供质粒的除外)。
5.2 病毒颗粒的总数和病毒滴度:如无特殊要求我们提供1mL滴度为1×107- 1×108个病毒基因组/mL的病毒储液。

 

 

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