服务热线:4008-513-777
用户名
密   码
  登陆 注册
     

 细胞转染

服务内容包括:

1 瞬时转染 :

    外源DNA/RNA进入受体细胞后,不整合到细胞的染色体上,几天内,大部分外源遗传物质会被核酸酶降解或随细胞分裂而稀释,救活是外源基因的短暂高水平表达(24-96人内检测),是过表达外源蛋白的简便方法,也适于研究启动子等调控元件。
 
服务项目包括:
    过表达载体的转染
    shRNA/miRNA载体的转染
    化学合成的siRNA/miRNA的转染
 
客户需提供:
   生长状况良好的宿主细胞株,一并提供细胞特性,培养条件及相关注意事项。
   我们也可以为客户代为购买细胞并且提供冻存保种服务,客户需要时我们可以随时邮寄。
   提供质粒,并说明质粒大小,浓度,抗性,拷贝数等相关背景资料。

 
2 稳定转染:

    通过各种基因转染技术,靶基因导入哺乳动物细胞后,一般在转染后48h,靶基因即可在胞内表达。根据实验需要,可对靶细胞进行筛选,建立长期稳定表达靶基因的稳定细胞系。根据真核表达载体中所带有的抗性标志,最常用的标志物有潮霉素(Hygromycin)和新霉素(Neomycin),选用相应的药物筛选,得到稳定表达外源基因的细胞系。
 
服务流程:
  ●  筛选浓度测定:以5天左右,细胞大部分死亡,10~14天细胞全部死亡时,最低抗生素浓度为最佳筛选浓度。
  ●  细胞接种:转染前24h接种细胞,确保转染时细胞汇合度在70%左右。
  ●  细胞转染:用阳性脂质体转染细胞。
  ●  抗生素筛选:用上述最佳筛选浓度筛选单克隆,并扩大构建稳定细胞系。
  ●  鉴定筛选结果:RT-PCR或Western Blot检测。
 
客户需提供:
  ●  具有筛选标记的真核表达载体(可为客户构建)。
  ●  待转染的细胞系及培养条件的说明(生长状态良好,可为客户代购)。

G418结构图
小知识:

    G418是一种氨基糖苷类抗生素,这种氨基糖类抗生素的结构和新霉素、庆大霉素、卡那霉素相似,在分子遗传试验中,是稳定转染最常用的抗性筛选试剂。它通过抑制转座子Tn601,Tn5的基因,干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和真核等细胞产生毒素 ,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞,也包括原生动物和蠕虫。当neo基因被整合进真核细胞DNA后,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达,使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长。



 

 

电话:

4008-513-777、0513-85175205、85175207

E-mail :

jane@biomics.cn      order@biomics.cn

在线联系:

在线联系在线联系      在线联系在线联系