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 细胞凋亡检测

1. Biomics提供的细胞凋亡检测服务

   细胞凋亡(Apoptosis):多细胞有机体为调控机体发育、维持内环境稳定,由基因控制的细胞主动性死亡过程。多细胞生物体内,某些细胞的死亡是个体发育中一个预定的,并受到严格程序控制的正常组成部分。不同于一般的细胞坏死(cell necrosis)。

1.1凋亡的生物学意义:

   1.1.1凋亡是一个系统的并普遍地程序性过程,是机体清除无用的或不想要的细胞的手段,凋亡与增殖对保持机体的动态平衡具有重要意义 。
   1.1.2凋亡涉及到多种疾病的发病机制,对预防和治疗这些疾病具有重要意义
       ▲过度凋亡:退化性疾病(老年性痴呆,帕金森综合症)病毒性疾病(艾滋病)等
       ▲凋亡不足:肿瘤自身免疫紊乱(类风湿性关节炎),红斑狼疮等
   凋亡具有生物复杂性,是多因素、多通路参与的过程,不能根据单一指标来判断细胞凋亡,为了提高检测的“准确性”、“特异性”和“灵敏度”,必须综合各种方法的优点,发展多参数检测方法,多指标同时检测;
   凋亡细胞不同时间出现的凋亡事件不同;而每个指征维持有一个时间段,所以需要在不同的时间点进行采样,把握好应用中的关键环节,并注意各种影响因子,以保证检测结果的准确性;
   凋亡检测一般先定性分析,再做进一步的量化测定。鉴定方法涉及细胞体系、死亡类型、诱导剂、检测技术、手段和条件等,选择与之相关的检测方法,以提高检测的准确性和精确性;
   为检测凋亡提供更加全面、准确、客观的实验依据,需充分了解各种方法的原理和特点,对检测结果做出合理的判断和分析。

1.2  本公司可提供的细胞凋亡的检测方法主要有:

   1.2.1  细胞形态学检测
      ▲核DNA片段检测
      ▲DNA ladder
      ▲Tunel法
   1.2.2  凋亡酶学检测:Caspase活性检测
   1.2.3细胞膜改变检测:Annexin V-FITC结合膜表PS实验
   1.2.4凋亡相关信号分子(mRNA 和蛋白)检测:TNF-α,P53,BCl-2和TFAR19等
   1.2.5其他
      ▲线粒体膜势能(DYmt)的检测
      ▲端粒酶活性检测等


2. 细胞凋亡检测产品种类

   2.1  Caspase活性荧光检测试剂盒
   2.2  Annexin V凋亡原位检测试剂盒
   2.3  DNA ladder琼脂凝胶电泳检测试剂盒
   2.4  TUNEl法凋亡检测试剂盒(比色法,荧光法可选)
   2.5  各种细胞凋亡诱导试剂


表:细胞凋亡与细胞坏死的比较

 

细胞凋亡

细胞坏死

细胞形态

细胞膜出芽,冒泡但完整性好,活组织中个别细胞死亡

细胞完整性破坏,成片细胞死亡,破坏组织结构

过 程

固缩核,浓染胞浆,脱离。凋亡小体

细胞肿胀,核淡染,凝固性坏死,无膜性小体

细胞器

细胞器未遭破坏,胞浆浓缩

细胞器肿胀溶解

染色质

染色质致密,凝集或边集浓染

染色质疏松变性粗糙

染料排斥试验

开始被排斥

染料掺入(膜破坏或通透性↑)

DNA破坏机制

核酸内切酶作用DNA裂解为200bp或其倍数片断(核孔裂开)

随机降解弥漫ATP膜损伤, 氧自由基损伤

结局

凋亡小体可被同种或异种细胞识别吞噬

吞噬细胞吞噬细胞碎片,溶解

组织反应

不引起炎症反应,迅速退化,无整个组织瓦解,不诱发组织的再生与修复,细胞生长增殖→凋亡

引起炎症反应,继发性组织损伤,诱发组织再生与修复,形成疤痕,坏死→补偿性增生→细胞增殖


正常细胞                  凋亡细胞
20%

 

 

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